Las células madre mesenquimales derivadas de médula ósea diseñadas por microrna-145 aliviaron la disfunción eréctil en ratas ancianas
Disfunción eréctil Misexologo
31 de Dic, 2019 . Catorce días después del trasplante, el ICP / MAP fue 0.79 ± 0.05 en el grupo OE-miR-145-BMSC, 0.61 ± 0.06 en el grupo BMSC, 0.57 ± 0.06 en el grupo vector-BMSC y 0.3 ± 0.01 en el grupo PBS . El tratamiento con OE-miR-145-BMSC mejoró significativamente la DE (P
La evidencia creciente muestra que las células madre mesenquimales (MSC) tienen capacidad de autorrenovación y el potencial de diferenciarse en una amplia gama de poblaciones celulares en ciertos entornos. Los tratamientos basados en MSC han demostrado generar efectos terapéuticos positivos en la DE relacionada con la edad [12,13,14]. Las MSC pueden ejercer efectos regenerativos, antiapoptosis y antifibrosis [15,16,17,18]. Sin embargo, el tratamiento de la DE con MSC todavía está en la fase de prueba, y los mecanismos detallados de acción de MSC siguen siendo difíciles de alcanzar.
Se ha descubierto que los microARN regulan la autorrenovación y la pluripotencia de las células madre. Cordes y col. [19] han informado de un papel crucial para miR-145 durante la diferenciación de células madre en células de músculo liso (SMC). La falta de miR-145 perjudica la diferenciación SMC [20, 21]. Los niveles elevados de miR-145 rescataron la expresión de marcadores SMC en ratas knockout SMC-Dicer [22].
Aquí, se establecieron BMSC que sobreexpresan miR-145, y se investigaron sus efectos y los mecanismos que los impulsan. Encontramos que las BMSC que sobreexpresan miR-145 aumentaron el número de SMC al enfocarse directamente en el factor 4 tipo Kruppel (KLF4) y reducir la expresión de colágeno 1 y metalopeptidasa de matriz 2 (MMP2); Además, las células redujeron la fosforilación del mediador de la señalización de TGF-?, SMAD2 al dirigirse al receptor beta del factor de crecimiento transformante beta 2 (TGFBR2). Estos cambios dieron como resultado respuestas eréctiles significativamente amplificadas en ratas envejecidas. Nuestros datos definen un efecto terapéutico positivo del trasplante de BMSC que sobreexpresan miR-145 en el tratamiento de la disfunción eréctil.
Las BMSC primarias de ratas se compraron de Cyagen Biosciences (Guangzhou, China) INC. Las células se mantuvieron en medio bajo en glucosa (DMEM; HyClone, EE. UU.) Que contenía 10% de suero fetal bovino (FBS; Gibco, EE. UU.) Y 1% de penicilina-estreptomicina ( Gibco, EE. UU.) En condiciones estandarizadas (5% de CO2, 37 ° C). Las células se pasaron cada 2-3 días. Se usaron BMSC de control y BMSC de ingeniería con microARN-145 entre los pasos 3 y 4.
Hannt Biotechnology (Shanghai, China) generó los lentivirus que expresan miR-145 (lentivirus-miR-145-GFP) o GFP (lentivirus-vector-GFP). Durante la transfección, las BMSC se cultivaron durante la noche en placas de 6 pocillos a una densidad de 1 x 104 / pocillo. Luego, las BMSC se tripsinizaron, se centrifugaron y se cultivaron en medio que contenía lentivirus-miR-145-GFP o lentivirus-vector-GFP a una concentración de 5 x 105 / pocillo. Después de 6 h de transfección, los sobrenadantes se descartaron y se reemplazaron con medio de cultivo celular fresco. Las células se cultivaron continuamente durante 3-5 días en la incubadora.
Las células se mantuvieron a 10.000 células / pocillo en placas de 96 pocillos durante 24 ha 37 ° C y 5% de CO2. A continuación, se mezclaron 10 ?l de solución CCK8 en cada pocillo, y las células se incubaron durante otras 2 h. El valor de densidad óptica fue detectado a 450 nm por un lector de microplacas (Biotek Elx08, EE. UU.). Los experimentos se realizaron por triplicado.
El ARN total se extrajo utilizando un kit de reactivos TRIzol (Thermo Fisher Scientific, EE. UU.). El ARN se transcribió inversamente usando el kit de reactivos PrimeScript® RT (TaKaRa, Tokio, Japón). Luego, se realizó qRT-PCR utilizando un sistema PRISM 7500 (Applied Biosystems, Waltham, MA, EE. UU.) Con un kit SYBR Premix ExTaqII (TliRNaseHPlus) (Takara). Los datos experimentales fueron procesados por el método 2 ??Ct. La expresión de genes relativos se normalizó a ?-actina. Todos los cebadores se enumeran en la Tabla 1.
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